使用目标特异性FRET探针进行特异性检测

分子信标是一个单链寡核苷酸序列，用两个荧光团标记，并保持“发夹”状结构。在目标序列的存在下，它们会展开、结合并发出荧光。分子信标由四部分组成：

• Loop：由与靶序列互补的分子信标的18-30个碱基对区域组成。
• Stem：在环的两个末端连接的是两个相互互补的（5至7个核苷酸残基）短寡核苷酸。
• 5'末端荧光团：在分子信标的5'末端共价连接有荧光染料。
• 3'末端淬灭剂：在分子信标的3'末端共价连接了一个非荧光猝灭剂。

2.2.1 Tide Fluor 寡核苷酸标记系列产品

Tide Fluor 染料经过优化，可用于FRET寡核苷酸和肽标记。我们的Tide Fluor 染料比香豆素，荧光素，罗丹明和花青等经典标记染料具有更强的荧光性和更高的光稳定性。它们是在不降低性能的情况下标记肽和寡核苷酸的最佳荧光染料。

表4.经典荧光标记染料

香豆素及其衍生物   荧光素染料及其衍生物   罗丹明染料及其衍生物   花青染料及其衍生物   吲哚菁绿（ICG）及其衍生物

表5.Tide Fluor 染料和光谱性质

Tide Fluor染料	Abs（nm）	Em（nm）	ε 1	Φ 2	260 nm处CF3	280 nm处的CF 4
Tide Fluor 1	345	442	20000	0.95	0.246	0.187
Tide Fluor 2WS	502	525	75000	0.9	0.211	0.091
Tide Fluor 2	500	527	75000	0.9	0.288	0.201
Tide Fluor 3WS	555	565	150000	0.105	0.079	0.079
Tide Fluor 3	555	584	85000	0.85	0.331	0.201
Tide Fluor 4	590	618	90000	0.91	0.489	0.436
Tide Fluor 5WS	649	664	250000	0.25	0.023	0.027
Tide Fluor 6WS	676	695	220000	0.18	0.111	0.009
Tide Fluor 7WS	749	775	275000	0.12	0.009	0.049
Tide Fluor 8WS	775	807	250000	0.08	0.103	0.109

1. ε= 最大吸收波长处的消光系数（cm ^-1 M ^-1）
2. Φ=水性缓冲液（pH 7.2）中的荧光量子产率
3. 260 nm处的CF是校正因子，用于消除染料对260 nm处的吸光度的影响（用于寡核苷酸和核酸标记）
4. 280 nm处的CF是校正因子，用于消除染料对280 nm处的吸光度的影响（用于肽和蛋白质标记）

2.2.2 Tide Quencher 淬灭剂系列产品

DABCYL是用于开发各种FRET应用的染料，但对于较长波长的染料（例如荧光素，罗丹明和花青）的低淬灭效率限制了其在敏感的荧光FRET探针开发中的应用，另外，DABCYL的吸收光谱对环境比较敏感。AAT Bioquest已开发出耐用的Tide Quencher 系列产品，用于开发更长波长的FRET探针。Tide Quencher 染料是消除经典淬灭剂限制的jue佳选择。

Tide Quencher 染料的主要优点：

• 探索其他淬灭剂无法实现的FRET应用。
• 多种反应形式便于自我构建所需的FRET生物分子。
• 与所需的荧光供体完全匹配。
• 更低的价格和更好的性能。

表6.Tide Quencher 染料和光谱性质

Tide Quencher 系列染料	Abs（nm）	ε	260 nm时的CF	280 nm时的CF
Tide Quencher 1	488	20,000	0.147	0.194
Tide Quencher 2	512	21,000	0.100	0.120
Tide Quencher 2WS	515	21,000	0.100	0.120
Tide Quencher 3	576	22,000	0.085	0.091
Tide Quencher 3WS	576	90,000	0.186	0.205
Tide Quencher 4	604	23,000	0.146	0.183
Tide Quencher 4WS	604	90,000	0.149	0.136
Tide Quencher 5	661	24,000	0.170	0.082
Tide Quencher 5WS	661	130,000	0.072	0.082
Tide Quencher 6WS	691	130,000	0.120	0.102
Tide Quencher 7WS	759	140,000	0.072	0.091

2.2.3 Covidyte 肽底物系列产品

Covidyte系列产品是AAT Bioquest针对COVID-19zui新研发的肽底物，用于通过FRET检测冠状病毒蛋白酶的强度。该系列产品为寻找冠状病毒蛋白酶抑制剂提供了高灵敏的荧光信号强度。

表7.Covidyte 肽底物

产品名称	货号	规格	Ex(nm)	Em(nm)
Covidyte ED450	13537	100 Tests	334	453
Covidyte EN450	13535	100 Tests	334	453
Covidyte TF670	13541	100 Tests	648	663
Covidyte IF670	13542	100 Tests	654	669

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